iLite ®技術(shù)

適用于整個藥物開發(fā)過程的多功能工具

iLite技術(shù)基于報告基因檢測格式，為整個藥物開發(fā)過程以及生物藥物監(jiān)測的應(yīng)用提供了無縫解決方案。  

該技術(shù)幾乎可以針對任何藥物靶標(biāo)進行開發(fā)，并提供一種簡單、快速和準(zhǔn)確的測試格式，用于測量和量化藥物活性和免疫原性。細(xì)胞以 Assay Ready 格式提供，無需細(xì)胞培養(yǎng)，并允許在部門之間或第三方合作者之間無縫轉(zhuǎn)移檢測。

通過將歸一化讀數(shù)和嵌合轉(zhuǎn)錄因子等功能與高度靈活的產(chǎn)品格式相結(jié)合，iLite技術(shù)可幫助您充分利用生物測定。

工作原理 - iLite ®基于細(xì)胞的技術(shù)原理

iLite基于細(xì)胞的檢測基于簡單的報告基因技術(shù)。對特定靶標(biāo)或配體具有特異性的受體在細(xì)胞表面表達。一旦配體與受體結(jié)合，就會觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)，從而導(dǎo)致啟動子區(qū)域與報告基因融合，在本例中為螢火蟲熒光素酶。 

報告基因的激活以及底物的添加將產(chǎn)生光。光量與與受體結(jié)合的配體的量和活性相關(guān)。

雙報告基因系統(tǒng)

當(dāng)配體與其受體結(jié)合時，特定的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑被激活，觸發(fā)編碼熒光素酶的特定報告基因構(gòu)建體的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)添加底物時，熒光素酶產(chǎn)生光，然后可以使用光度計將熒光素酶的量以及由此配體的量和活性測量為光發(fā)射。

iLite細(xì)胞是它們還包含第二個報告基因，該基因受組成型啟動子控制，這意味著它在任何活細(xì)胞中連續(xù)表達。換句話說，第二個報告基因產(chǎn)生的光量將與活細(xì)胞的數(shù)量相關(guān)，因此可用于標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果以補償細(xì)胞數(shù)量的差異。

ILITE ADCC 技術(shù) - 它是如何工作的？抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性 (ADCC) 是一種免疫反應(yīng)，其中攜帶 Fc 受體的效應(yīng)細(xì)胞識別并殺死表面表達腫瘤或病原體特異性抗原的抗體包被的靶細(xì)胞。許多基于抗體的療法至少部分依賴于它們在患者中誘導(dǎo) ADCC 的能力。 iLite  ADCC 產(chǎn)品線提供了一種方便而強大的方法來測量抗體在體外 引發(fā) ADCC 的功效 。  

基于 Fc 受體、抗體和靶標(biāo)交聯(lián)的發(fā)光

當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與與其靶細(xì)胞結(jié)合的藥物抗體相互作用時，ADCC 過程就會被觸發(fā)。效應(yīng)細(xì)胞表面上的FcγIIIa (CD16a)受體與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，從而在效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞之間建立橋梁。

在形成該橋之后，工程化的效應(yīng)細(xì)胞將通過細(xì)胞  內(nèi)途徑產(chǎn)生熒光素酶，并專門從這種交聯(lián)和信號傳導(dǎo)中產(chǎn)生發(fā)光，而不是像在體內(nèi)情況下那樣裂解靶細(xì)胞。發(fā)光的強度與藥物誘導(dǎo) ADCC 的能力相關(guān)。

與抗體結(jié)合后，效應(yīng)細(xì)胞中的 NFAT、CREB、NfκB、API 和 Jak-STAT 通路被激活。控制螢火蟲熒光素酶基因的啟動子經(jīng)過巧妙設(shè)計，包含所有這些途徑的結(jié)合位點。與僅依賴 NFAT 響應(yīng)啟動子的市售報告基因相比， 這更接近地反映了體內(nèi)FcγRIIIA 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。  

標(biāo)準(zhǔn)化基因可輕松進行樣本之間的比較

與大多數(shù)iLite細(xì)胞系一樣，iLite ADCC 效應(yīng)細(xì)胞也具有次級熒光素酶讀數(shù)，來自在組成型啟動子控制下表達的熒光素酶基因。這使得能夠根據(jù)細(xì)胞數(shù)量對每個單獨的讀數(shù)進行標(biāo)準(zhǔn)化，并補償潛在的基質(zhì)效應(yīng)。    

工程化靶細(xì)胞可篩選非特異性激活  

iLite ADCC 系統(tǒng)配備了一套工程同系物 (+) 和 (- )靶細(xì)胞，可以精確、特異性地確定 ADCC 活性的差異。它還可以比較針對相同抗原的不同治療抗體之間的 ADCC 活性。 

目標(biāo) (+) 細(xì)胞

靶（+）細(xì)胞 已被設(shè)計為通過內(nèi)源表達的過度激活或通過插入編碼該抗原的基因來過度表達特定抗原。

這使得抗原在細(xì)胞表面上得到穩(wěn)定且受控的表達。

目標(biāo) (-) 細(xì)胞

目標(biāo) (-) 細(xì)胞 基于與目標(biāo) (+) 細(xì)胞相同的細(xì)胞背景，但不呈現(xiàn)特定的表面目標(biāo)分子。因此，效應(yīng)器和靶細(xì)胞之間無法通過抗體建立交聯(lián)，并且不會產(chǎn)生螢火蟲熒光素酶的發(fā)光。

因此，特異性抗原陰性靶細(xì)胞提供了一種檢測和校正有時在人血清樣品中觀察到的非特異性效應(yīng)的方法。