4-香豆酸：輔酶A連接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL)試劑盒

4CL是連接苯丙酸途徑與木質(zhì)素特異合成途徑的關鍵酶，主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔酶A酯，是合成木質(zhì)素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調(diào)控點。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量而提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

測定原理：

4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，在333nm下測4-香豆酸CoA生成速率，即可反映4CL活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體25 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；

粗酶液提取：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀40℃預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至333nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務必使用UV板）。

3. 樣本測定

（1）在試劑二中加入5mL試劑一充分溶解混勻，置于40℃水浴預熱10min；現(xiàn)配現(xiàn)用（配好后24h內(nèi)用完）；

（2）對照管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻，立即記錄333nm處40℃反應30min后的吸光值A1。

（3）測定管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL試劑二，混勻，立即記錄333nm處40℃反應30min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。每個測定管設一個對照管。

上海牧榮生物科技有限公司

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4-香豆酸：輔酶A連接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL)試劑盒

• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide